利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧的检测 。DCFH-DA本身没有荧光 ,可以自由穿过细胞膜 ,进入细胞内后 ,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH 。而DCFH不能通透细胞膜 ,从而使探针很容易被装载到细胞内 。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF ,检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平 。
| 实验流程
Step1 :制成单细胞悬液(组织样本)
Step2 :溶血(细胞样本无需进行此步骤)
Step3 :离心去上清
Step4 :调整细胞密度
Step5 :加入相应的荧光探针
Step6 :孵育
Step7 :洗涤后离心去上清
Step8 :上机检测
| 实验费用 :根据客户检测需求以及实验复杂程度进行报价
| 客户注意事项
1.标本收集与保存
>> 组织样品 :新鲜组织放入液氮或-70度保存 ,组织不少于100mg(约绿豆大小);
>> 培养细胞 :通过细胞计数取不少于2000000个细胞于EP管 ,加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂 ,混匀后保存于冰箱(-70℃ ,避免反复冻融);
>> 血液细胞标本 :以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂 ,保存(-70℃可长期保存 ,避免反复冻融);
>> 血清或细胞培养液标本 :离心去掉杂质后取上清入EP管 ,保存(以上4℃可保存15-20天 ,-70℃可长期保存 ,避免反复冻融) 。
2.样本运输 :可选以下任何的一种方式寄送标本
>> 组织样本 、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后加冰袋运输;
>> 细胞样本也可以直接快件寄送培养瓶(密封保证不污染 ,培养液不漏出 ,细胞不要长得太满 ,50%左右 ,灌满培养液);
>> 血清或上清液直接加冰袋寄送(密封保证液体不漏出 ,视路途远近2-3天可到达) 。
| 送检与交付标准
样品类型 | 样品需求 | 运输条件 |
组织 | 离体后组织制成单细胞悬液 ,加入PBS培养基内 | 常温运输 |
活细胞 | 样本量 :1*106个细胞/TEST ,加入PBS培养基内 | 常温运输 |
血液 | 将血液采集在EDTA肝素钠的抗凝采血管内 | 常温运输 |