细胞转染是指将外源分子如DNA ,RNA等导入真核细胞的技术 。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展 ,转染已经成为生命科学研究和控制真核细胞基因功能的基本操作之一 。在研究基因功能 、调控基因表达 、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中 ,其应用越来越广泛 。
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转染方法有多种 ,包括介质介导 、电穿孔 ,其中介质又有早期的磷酸钙法 、脂质体法和病毒介导 ,目前使用最广泛的是脂质体介导法 。转染的关键是高转染效率和低细胞毒性 ,即把核酸转入尽可能多的细胞 ,又要使转染了核酸的细胞尽可能多地存活 ,且没有发生分化 。
无论采用哪种转染技术 ,要获得最优的转染结果 ,可能都需要对转染条件进行优化 。影响转染效率的因素很多 ,从细胞类型 、细胞培养条件和细胞生长状态 ,到转染方法的操作细节 ,都需要考虑 。
细胞转染实验注意事项
1 、转染是不能使用含有血清的培养液 ,血清对转染效率影响很大
2 、转染前铺板时用无双抗培养基 ,抗性的增加会影响转染效率
3 、铺板24小时内进行转染
4 、整个操作过程轻柔 ,避免剧烈震荡
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