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反转录PCR

反转录PCR(Reverse Transcription ,RT-PCR)又称为逆转录PCR 。其原理是 :提取组织或细胞中的总RNA ,以其中的mRNA作为模板 ,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA 。再以cDNA为模板进行PCR扩增 ,而获得目的基因或检测基因表达 。

RT- PCR即逆转录PCR ,是将RNA的逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应(PCR)相结合的技术 。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛 ,可用于检测细胞/组织中基因表达水平 ,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列等 。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级 ,使一些极为微量RNA样品分析成为可能 ,该技术主要用于 :分析基因的转录产物 、获取目的基因 、合成cDNA探针 、构建RNA高效转录系统 。

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 反转录PCR服务流程 

1 、mRNA抽提

2 、反转录合成cDNA第一链

3 、PCR扩增双链cDNA

4 、纯化PCR产物,克隆PCR产物到标准载体测序

5 、亚克隆到其他表达载体(可选)

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