荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针 ，对PCR产物进行标记跟踪 ，实时监控反应过程 。随着PCR循环数的递增 ，PCR产物不断积累 ，荧光信号也会相应的增加 ，这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测 ，并以b-Actin或GAPDH等管架基因作为内参照 ，对目的基因的表达量进行半定量检测 。

荧光定量PCR技术具有特异性更强 、有效解决PCR污染问题 、自动化程度高等特点 ，目前已得到广泛应用 。实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃 ，运用该项技术 ，可以对DNA 、RNA样品进行相对定量 、绝对定量和定性分析 。

凯发k8国际检测生物将根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法 。通过对DNA或RNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量 、绝对定量和定性分析 。

SYBR Green荧光染料法 ：适用于任何DNA ，无需设计探针 ，采取双标准曲线法 ，实验周期短 ，结果重复性好 ，灵敏度高 。

TaqMan荧光探针法 ：经验丰富的实验技术人员设计探针 ，对目标基因有高特异性 ，实验重复性好 ，相对于SYBR Green法 ，灵敏度更高 。

 荧光定量PCR检测分类 

1 、mRNA表达量水平检测 ：相对定量法 。

2 、MicroRNA表达量水平检测 ：通过设计特殊茎环结构的反转录引物 ，结合实时定量PCR可以精确检测微量样品中microRNA表达水平 。内参基因一般用U6 。

3 、基因拷贝数检测 ：如检测样品中不同细菌含量 、基因工程菌目的基因拷贝数 、环境中耐药基因检测等 。采用绝对定量法 。

荧光定量PCR服类容 

1 、绝对定量 ：

绝对定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品 。使用已知浓度的标准品制作3个点以上的标准曲线后 ，可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量(起始拷贝数)分析 。

2 、相对定量(mRNA表达量分析) ：

基因表达的研究一般采用相对定量的方法 。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因内标同时分别进行定量 ，然后求出对于参比基因的目的基因的相对量 。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较 ，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析 。参比基因通常选用表达量相对恒定的House Keeping Gene ，如 ：GAPDH 、b-actin等 。通过同时对参比基因的实时检测 ，可以对样品之间由于起始细胞数不同 、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正 ，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的 。

 荧光定量PCR服务流程 

总RNA提取及定量 → PCR引物设计及反转录 → 荧光引物设计(SYBR Green 荧光染料法)/探针设计(TaqMan 荧光探针法) → 荧光定量PCR ，进行扩增曲线 、溶解曲线 、表达量差异分析等实验 → 数据分析与处理

荧光定量PCR送检要求

新鲜或保存完好的样品——细胞 ：≥１×１０６ ，组织≥２０　ﻪｍｇ ，血液≥２００μｌ 。组织样品用液氮速冻后保存于－８０℃ ，细胞也可以在加入Ｔｒｉｚｏｌ后保存于－８０℃ ，后续样品需用干冰寄送 。样品需要注意避免各类污染和反复冻融 。

凯发k8国际检测秉承“科学 · 独立 · 诚信 · 高效”的服务理念 ，以专业 、专注的态度为您提供精确的检测技术和咨询 、科研服务 。