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新手必看!小鼠粪便短链脂肪酸检测的样本采集与保存指南
发布日期:2025-05-20
浏览次数:103

在肠道微生物与代谢研究领域,小鼠粪便短链脂肪酸(SCFAs)检测已成为揭示肠道健康与疾病机制的关键技术。然而,样本采集与保存的规范性直接影响检测结果的准确性,稍有不慎便可能导致数据偏差。对于该领域的科研人员而言,掌握科研的样本处理流程至关重要。以下内容将系统阐述小鼠粪便短链脂肪酸检测样本采集与保存的全流程,助力您的科研之路。

短链脂肪酸检测

一、样本采集前的准备工作

1.1 实验小鼠的选择与管理

在进行小鼠粪便样本采集前,需确保实验小鼠的健康状态与实验条件一致性。选择遗传背景清晰、周龄相近的小鼠,按照实验设计进行分组饲养。饲养环境应严格控制温度(20 - 26℃)、湿度(40% - 70%)和光照周期(12h 光照 / 12h 黑暗),统一饲料与饮水标准,避免因环境或饮食差异影响短链脂肪酸的产生与代谢。

1.2 采样工具与耗材准备

准备无菌、无外源污染的采样工具,如无菌 EP 管、无菌镊子、无菌手套、冰盒等。EP 管建议选择密封性良好的 1.5mL 或 2mL 规格,在使用前可进行高压灭菌处理,以消除潜在的干扰因素。同时,准备足够数量的标签,清晰标注小鼠编号、采样时间等信息,便于后续样本管理。

二、样本采集流程规范

2.1 自然排便采集法

自然排便采集是较为常用的方法。在清晨小鼠活跃时段,将小鼠单独转移至干净、无菌的采集笼中。采集笼底部可铺设无菌滤纸,便于收集粪便。密切观察小鼠排便情况,使用无菌镊子迅速夹取新鲜排出的粪便,避免粪便与垫料、尿液等接触。每只小鼠的粪便样本应单独收集,确保样本的独立性和准确性。一般情况下,每只小鼠采集 100 - 200mg 粪便即可满足检测需求。

2.2 直肠刺激采集法

对于需要定时采集或粪便难以自然排出的情况,可采用直肠刺激采集法。第一时间将小鼠进行适当麻醉(需遵循动物实验伦理规范),使用无菌棉签蘸取少量无菌生理盐水,轻柔插入小鼠直肠约 0.5 - 1cm,轻轻旋转棉签刺激直肠,促使粪便排出。采集完成后,将棉签上的粪便转移至无菌 EP 管中。此方法需注意操作轻柔,避免对小鼠造成伤害,且要确保每次操作的无菌性。

三、样本保存的关键要点

3.1 短期保存

若样本需在 24 小时内进行检测,可将采集后的粪便样本置于 4℃冰箱中暂存。4℃环境可在短时间内抑制微生物的代谢活动,减缓短链脂肪酸的降解速度,但需注意避免样本反复冻融,防止细胞破裂导致内容物释放,影响检测结果。

3.2 长期保存

对于无法及时检测的样本,长期保存是必要措施。建议将样本迅速置于 -80℃超低温冰箱中冷冻保存。在放入 -80℃冰箱前,可先将样本放入 -20℃冰箱预冻 1 - 2 小时,以减少冰晶对细胞结构的破坏。长期保存过程中,应尽量减少样本取出次数,如需取用部分样本,需使用无菌工具,并快速完成操作后重新放回 -80℃冰箱,确保样本始终处于低温环境。

3.3 样本保存介质的选择

除了低温保存,合适的保存介质也能有效保护样本中的短链脂肪酸。现在,常用的保存介质包括酸化甲醇、饱和氯化钠溶液等。酸化甲醇可顺利获得抑制微生物生长和酶活性,稳定短链脂肪酸;饱和氯化钠溶液则可顺利获得高渗环境抑制微生物代谢。将粪便样本与保存介质按适当比例混合(如 1:3 - 1:5)后,再进行低温保存,可进一步提高样本的稳定性。

四、样本运输注意事项

若需将样本运输至其他实验室进行检测,需确保样本在运输过程中保持低温状态。使用干冰作为制冷剂,将样本置于密封的保温箱中运输。干冰的用量需根据运输时间和环境温度进行调整,一般建议每 24 小时补充适量干冰,以维持箱内 -80℃左右的低温环境。同时,要实行样本的防震保护,避免运输过程中的颠簸对样本造成物理损伤。

规范的小鼠粪便短链脂肪酸检测样本采集与保存流程,是获取可靠实验数据的前提。科研人员在实际操作中,要关注每一个细节,确保样本的真实性和有效性。如您有短链脂肪酸检测需求,欢迎在线咨询!

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